AVALIAÇÃO DO EFEITO DE PROTEASES CISTEÍNICAS DO FRUTO DE PSEUDANANAS MACRODONTES (PRPM) SOBRE FIBROBLASTOS MURINOS

Resumo

A Pseudananas macrodontes é uma planta da família Bromeliaceae,comum na América do Sul e estudos anteriores já demonstraram a ação antiinflamatória das proteases presentes em seus frutos nos modelos de inflamação aguda crônica. Acredita-se que assim como a papaína desempenha um papel importante no reparo tecidual a PrPM também o desempenhe.O objetivo deste estudo é avaliar o efeito de um extrato parcialmente purificado contendo proteases cisteínicas do fruto de P.macrodontes (PrPM) sobre a proliferação e cicatrização in vitro (scratch) de uma linhagem de fibroblastos murinos (L929).Fibroblastos L929 foram plaqueados (2x10^4 cél/poço) com DMEM a 2,5% de soro fetal bovino a 37°C, com 5% de CO2. Após 24h, a PrPM (3,12 – 12,5 μg/mL) foi incubada por 24, 48 e 72h e foi realizado o ensaio do MTT para avaliar a viabilidade celular. No ensaio do scratch a população plaqueada foi de 5×10^4 células/mL, onde é feito um arranhão com uma pipeta estéril, e após 24h a PrPM (3,12 – 12,5 μg/mL) foi adicionada e a análise temporal foi realizada por fotografias após 24 e 48h de incubação. A análise estatística foi feita por ANOVA seguida de Bonferroni. No ensaio do MTT, após 24h e 72h de incubação da cultura com a PrPM não se constatou diferença estatística em relação aos grupos.Com 48h houve aumento da proliferação nas três concentrações diferentes da PrPM,em relação ao grupo DMEM 2,5% (p<0,001). No ensaio do Scratch, após 24h houve um aumento da proliferação celular em todas as concentrações da PrPM em relação ao veículo(p<0,05) e em relação ao DMEM 2,5% houve diferença estatística apenas nas concentrações de 3,12 μg/mLe 6,25 μg/mL(p<0,05).Após 48h houve significância nas três concentrações de PrPM em relação ao DMEM 2,5%(p<0,001)e em relação ao veículo apenas 3,12μg/mLe 6,25 μg/mL(p<0,001).As proteases cisteínicas da P. macrodontes estimularam a proliferação de fibroblastos, fato que pode ser relevante para o reparo tecidual de lesões. Agradecimentos ao CNPq.