ESTABLECIMENTO DE UM PROTOCOLO DE PURIFICAÇÃO DE UMA BETA-1,3-GLUCANASE DO LÁTEX DE FICUS BENJAMINA L. COM AÇÃO CONTRA FUNGOS PATOGÊNICOS
Resumo
Introdução: Os fungos podem ser benéficos ou causarem doenças em animais e plantas. As beta-1-3-glucanases são proteínas que apresentam potencial biotecnológico para controle de fungos patogênicos. Em estudos prévios, nosso grupo de pesquisa observou haver alta atividade beta-1,3-glucanásica em frações proteicas do látex de Ficus benjamina. Objetivo: Purificar uma beta-1,3-glucanase do látex de F. benjamina L. com atividade antifúngica relevante. Metodologia: O látex foi coletado em solução tampão e processado para obtenção das Proteínas do Látex (PL). O PL foi fracionado com sulfato de amônio, nas faixas 0-30 e 30-60%. A fração 30-60% foi cromatografada em coluna de afinidade de quitina. O primeiro pico retido à matriz de quitina foi recuperado e cromatografado em coluna de troca-iônica CM-Sepharose. O único pico recuperado da matriz de troca-iônica, denominado PR-CM, foi concentrado para aplicação numa coluna de Superdex G-75 e, também, testado quanto à inibição da germinação de esporos de Botrytis cinerea e do crescimento de três espécies de Candida (C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis). Todas as frações proteicas obtidas foram ensaiadas para verificar a presença de atividade beta-1,3-glucanásica e grau de pureza. Resultados: O PR-CM inibiu em 28,4% e 43,9% o crescimento de C. albicans e C. tropicalis, respectivamente. Também, inibiu a germinação de esporos de B. cinerea. Após cromatografia do PR-CM em Superdex G-75, 5 picos foram obtidos. Análise destes picos por SDS-PAGE mostrou que o último pico obtido apresentou duas bandas proteicas, com Mm de cerca de 22,8 e 51,8 kDa, respectivamente. Conclusão: O protocolo desenvolvido para purificação de uma beta-1,3-glucanase foi satisfatório, mas etapas adicionais para obtenção da enzima com auto grau de pureza faz-se necessárias, a fim de que sua atividade antifúngica possa ser comprovada, o que determinará seu real potencial biotecnológico.
Publicado
2019-01-14
Edição
Seção
XXXVII Encontro de Iniciação Científica
Licença
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