TOXINA A DO CLOSTRIDIUM DIFFICILE ATIVA CÉLULAS GLIAIS ENTÉRICAS E INDUZ ATIVAÇÃO DE NFΚB

Autores

  • Angeline Maria Holanda Pascoal da Silva
  • COSTA DEIZIANE V S
  • MOURA-NETO VIVALDO
  • BOLICK DAVID T
  • WARREN CIRLE A
  • Gerly Anne de Castro Brito

Resumo

Risco aumentado de diarreia tem sido evidenciado em pacientes após infecção por Clostridium difficile (C. diff.). Estudos em células gliais entéricas (CGEs) são relevantes uma vez que essas células regulam a função de neurônios e contribuem para a resposta inflamatória. Dessa forma, objetivou-se investigar os efeitos da toxina A do C.diff. (TcdA) em CGEs. CGEs foram incubadas com TcdA em várias concentrações (10, 50 e 100 ng/mL) e tempos experimentais (30 min a 48h) para avaliar a viabilidade celular por MTT e alterações morfológicas. Realizou-se qPCR de GDNF, GFAP e S100B para avaliar a ativação de CGEs pela TcdA. Níveis de S100B extracelular e intracelular foram avaliados por ELISA (sobrenadante) e Western Blot (lisado celular) respectivamente. A ativação de NFκB foi mensurada por imunofluorescência de NFκBp65 e expressão gênica de IL-6 por qPCR. Expressão de RAGE foi analisada por qPCR. Para investigar o papel de S100B/RAGE na expressão de S100B e IL-6 por CGEs expostas a TcdA, as células foram incubadas com FPS-ZM1 (antagonista de RAGE) uma hora antes da incubação com TcdA. TcdA (50 and 100 ng/mL) diminuiu a viabilidade de CGEs após 12h de incubação e induziu arredondamento dessas células após 6h. Além disso, estimulou a expressão de S100B, GFAP e GDNF. No entanto, houve redução inicial da expressão de GFAP. TcdA aumentou S100B no sobrenadante de CGEs sem alterar seus níveis intracelulares, bem como estimulou a ativação de NFκB por aumentar o número de núcleos positivos para NFκBp65 e elevou de forma dose-dependente a expressão gênica de IL-6. TcdA (100 ng/mL ) estimulou a expressão gênica de RAGE. FPS-ZM1 reduziu a expressão gênica de S100B e IL-6 em CGEs expostas a TcdA. Conclui-se que TcdA induz redução da viabilidade e arredondamento de CGEs, bem como estimula a ativação dessas células com aumento da liberação de S100B, ativação de NFκB e expressão de IL-6. RAGE está envolvido na expressão de IL-6 e S100B induzida por essa toxina.

Publicado

2019-01-14

Edição

Seção

XXXVII Encontro de Iniciação Científica