AVALIAÇÃO DA ASSOCIAÇÃO DE INIBIDORES MEIÓTICOS DURANTE A PRÉ-MATURAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS BOVINOS

Resumo

Devido ao seu caráter antioxidante, a melatonina contribui para o sucesso da maturação oocitária. Todavia, oócitos de folículos antrais médios precisam passar por um período de maturação in vitro na presença de fatores de crescimento e de substâncias inibidoras da maturação nuclear, a fim de bloquear a meiose e aumentar o tempo para a capacitação do oócito para alcançar a metáfase II com eficiência. No entanto, o aumento do período de cultivo in vitro desses oócitos, pode ocasionar uma excessiva produção de Espécies Reativas de Oxigênio (EROS). Nesse sentido, protocolos de MIV vem sendo desenvolvidos com a utilização de etapas prévias de pré-maturação in vitro e com o uso de inibidores meióticos. Este estudo tem como objetivo avaliar os efeitos dos inibidores meióticos durante a fase de pré-maturação in vitro, para que, posteriormente, os complexos cúmulos oócítos (COCs) possam ser maturados na presença de diferentes concentrações de melatonina (10 -6; 10 -7 e 10 -8 M). Inicialmente, os COCs foram pré-maturados em meio TCM (controle) sozinho ou suplementado com 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) forskolin (FSK); IBMX peptídeo natriurético do tipo-C (CNP), FSK CNP ou IBMX CNP FSK durante 8 h, 38,5°C, com 5% de CO2. Após a pré-MIV, a configuração da cromatina foi avaliada e analisada sob microscópio epi-fluorescente. Os oócitos foram classificados de acordo com o estágio de maturação nuclear em vesícula germinativa (VG) ou quebra da vesícula germinativa (RVG). Após a definição do bloqueador a ser usado na pré-maturação, os COCs foram pré-maturados com adição de CNP + FSK.A MIV, a configuração da cromatina foi avaliada e analisada sob microscópio epi-fluorescente invertido (Leica, DMI4000B) conforme descrita na fase de pré-miv. O tratamento com FSK+CNP apresentou maior taxa de oócitos em VG quando comparado aos demais tratamentos. Em conclusão, a associação do CNP e FSK é capaz de inibir a retomada meiótica de oócitos bovinos durante 8 h de pré-maturação in vitro.