Avaliação de protocolos de extração de DNA genômico na verificação da presença de Listeria monocytogenes por PCR

Resumo

Listeria monocytogenes é um patógeno transmitido por alimentos que pode causar sérias doenças, principalmente em indivíduos imunodeprimidos. A identificação rápida e precisa desta bactéria nos alimentos é uma grande aliada na prevenção da sua transmissão. Os métodos moleculares têm se mostrado efetivos no que se refere a estes quesitos, no entanto, ainda é difícil determinar a melhor técnica de extração do DNA em função das características de cada micro-organismo. A eficiência da PCR depende de DNA em quantidade e qualidade satisfatórios. O presente trabalho teve por objetivo avaliar duas técnicas de extração de DNA, uma por detergente CTAB e outra por lise térmica. Foram utilizadas quatro cepas de L. monocytogenes, sendo uma ATCC 19117 e três isoladas de ambiente industrial (ralos de um frigorífico), previamente identificadas por métodos convencionais e confirmadas por métodos moleculares. A extração por lise térmica apresentou resultados satisfatórios, proporcionando a visualização de bandas visíveis e sem interferentes na reação de PCR. A lise térmica mostrou-se um bom protocolo de extração, pois além de fornecer DNA na quantidade e qualidade necessária para a amplificação, é uma técnica simples, rápida e barata.

Palavras-chave: Métodos moleculares; microbiologia; detergente CTAB; lise térmica.