N-Acetilcisteína mantém a viabilidade de folículos secundários bovinos cultivados in vitro

Resumo

O aumento do estresse oxidativo em sistemas de cultivo leva a necessidade da suplementação do meio base com substâncias antioxidantes. A N-Acetilcisteína (NAC) é um composto que age indiretamente na produção de Glutationa (GSH) e diretamente nos radicais livres devido ao seu grupo sufridila. Tais aspectos demonstram que a NAC possui um potencial antioxidante que pode ser testada como aditivo aos meios de cultivo para folículos pré-antrais bovinos. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da NAC sobre a viabilidade de folículos secundários bovinos cultivos in vitro por 18 dias. Para isso, folículos secundários (150-250µm) foram isolados e cultivados individualmente a 38,5°C, em 5% de CO2 por 18 dias, em meio TCM-199 suplementado com FSH (0,05 IU/mL), selênio (5 ng/mL), insulina (10 μg/mL), ácido ascórbico (50 μg/mL), transferrina (5,5 μg/mL), BSA (3,0 mg/mL), glutamina (2 mM), hipoxantina (2 mM) penicilina (100 μg/mL) e estreptomicina (100 μg/mL) sozinho ou suplementado com diferentes concentrações de NAC (1, 5 ou 25mM). Ao final do cultivo, os folículos tiveram sua viabilidade avaliada por microscopia de flurescência, onde foram incubados em 100μL de TCM-199 contendo 4 mM de calceína-AM e 2 mM de homodímero de etídio a 37 °C por 15 min. Oócitos e células da granulosa foram considerados viáveis quando o citoplasma apresentava coloração positiva para calceína-AM (verde) ou não-viáveis quando a cromatina estava positivamente marcada com homodímero de etídio (vermelho). Os resultados mostraram que todos os folículos cultivados em meio controle (TCM-199) ou suplementado com 1, 5 ou 25mM de NAC, foram considerados viáveis ao final do período de cultivo, pois mostravam marcação positiva para calceína, e não para homodímero de etídio. Assim, conclui-se que as concentrações de 1, 5 e 25mM de NAC auxiliaram na manutenção da viabilidade de folículos secundários bovinos cultivados in vitro por 18 dias.