FREQUÊNCIA DE POSITIVIDADE DE QPCR PARA MYCOBACTERIUM LEPRAE EM AMOSTRAS EM CONTATOS DE PACIENTES COM HANSENÍASE MENORES DE 16 ANOS DE IDADE

Resumo

Introdução: A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae. O exame físico não identifica os estágios iniciais da doença, quando as manifestações clínicas ainda não estão presentes. Dessa forma, um método de detecção precoce do bacilo é fundamental para a avaliação de contatos de pacientes com hanseníase, principalmente crianças e jovens, pois diagnóstico nessa faixa etária indica transmissão ativa do bacilo na comunidade. Objetivo: Empregar um método de PCR em tempo real por SYBR Green para avaliar a presença de DNA de M. leprae em contatos de pacientes com hanseníase. Metodologia: DNA de M. leprae (padrão primário) foi obtido a partir de bacilos liofilizados (BEI Resources, ATCC, EUA). Amostras de sangue total de pacientes (n=15) e contatos menores de 16 anos de idade (n=69), residentes em São Gonçalo do Amarante, CE, foram coletadas para avaliar a presença de DNA de M. leprae. O DNA foi extraído utilizando o Kit Biopur Mini Spin Plus (Brasil), seguindo as recomendações do fabricante. qPCR foi realizada, utilizando primers específicos para RLEP (Invitrogen, EUA) e reagente PowerUp SYBR Green Master Mix (Thermo Scientific, EUA), conforme protocolo do fabricante. Curva de calibração foi construída, utilizando diluições seriadas na razão 10 do padrão. A amplificação foi realizada em termociclador Bio-Rad CFX96 e a análise dos dados no programa CFX Manager. Resultados: A curva de calibração mostrou uma eficiência de 86,5%, com R²=0,987. A sensibilidade do teste foi de 10E-4 ng/µL de DNA de M. leprae, com Cycle Threeshold (Ct) de 32, sendo este o cut-off. Todas as amostras de DNA extraídas de pacientes e contatos foram negativas. Conclusão: Há grande possibilidade do teste empregando-se Sybr Green não apresentar sensibilidade analítica adequada para a detecção de DNA de M. leprae em amostras de sangue, Protocolos alternativos serão testados.