ESTUDOS ESTRUTURAIS DA LECTINA DOS OVOS DO OURIÇO-DO-MAR ECHINOMETRA LUCUNTER: EXPRESSÃO E ANÁLISE POR ESPECTROMETRIA DE MASSAS.

Resumo

Lectinas são proteínas de origem não imune que apresentam ligação específica e reversível a carboidratos. A compreensão das interações proteína -carboidrato permite elucidar o papel fisiológico dessas moléculas, por isso, os estudos estruturais são de extrema importância. A expressão de proteínas recombinantes permite a produção heteróloga desses compostos, produzindo proteínas de forma homogênea e em larga escala para fins biotecnológicos. ELEL é uma lectina presente nos ovos do ouriço-do-mar Echinometra lucunter com massa molecular estimada em SDS-PAGE de 22 kDa e 14 kDa na ausência e presença de 2-mercaptoetanol, respectivamente, demostrando ser uma proteína dimérica. Em ESI-MS, a lectina apresenta duas isoformas, ELEL-1 e ELEL-2, com massa molecular monomérica determinada de 11.045±2 Da e 11.643±2 Da, respectivamente. ELEL foi capaz de aglutinar bactérias, demostrando seu potencial antibacteriano. O presente trabalho objetivou a expressão heteróloga de uma das isoformas (rELEL-1) e análise da proteína recombinante por espectrometria de massas. O gene sintético foi inserido no vetor de expressão pET32a, contendo resistência à ampicilina, proteína de fusão tiorredoxina e sítio para protease TEV. Os testes de expressão foram conduzidos em diferentes cepas de Escherichia coli: Bl21(DE3), Rosetta-gami; Origami B(DE3)pLysS e ArcticExpress. Diferentes variações de temperatura (18 °C, 25 °C, 30 °C e 37 °C) e de concentração de IPTG (0,05; 0,1; 0,5 ou 1 mM) foram testadas e analisadas por SDS-PAGE. Após a expressão, a banda mais evidente foi excisada do gel, digerida e avaliada por MS/MS. Na expressão, a lectina foi observada na fração insolúvel em todas as condições testadas, e a análise por MS/MS confirmou a expressão da proteína de fusão- lectina de forma heteróloga. Desta forma, fomos capazes de produzir a rELEL, porém mais testes serão necessários para tornar a expressão ou proteína expressa na forma solúvel. Apoio financeiro: UFC, CNPq, CAPES.