AVALIAÇÃO DO EFEITO DE UMA FRAÇÃO PROTEICA ISOLADA DO LÁTEX DE CALOTROPIS PROCERA EM FIBROBLASTOS MURINOS (L929)

Abstract

Calotropis procera é uma planta da família Apocynaceae, que possui um látex, do qual foi extraída uma fração proteica denominada CpLP, que demonstrou ação cicatrizante em modelos animais.O fibroblasto é uma célula importante na cicatrização tecidual, atuando na produção da matriz, necessária na formação do tecido de granulação e produção de colágeno que confere integridade e força ao tecido.O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito in vitro de CpLP sobre a migração, proliferação e liberação de mediadores em fibroblastos murinos (L929). Para avaliar o estímulo de proliferação e migração celular, foi realizado o ensaio do scratch. As células foram plaqueadas e após 24h foi realizado um arranhão, posteriormente o tratamento com CpLP(0,78–3,12μg/mL) e foi avaliada a taxa de migração após 6,12,18 e 24h. O mesmo ensaio foi realizado com o uso do antiproliferativo mitomicina para avaliação exclusiva da migração celular, nos mesmos tempos. A fim de investigar a liberação de mediadores,foram dosados TGF-b e VEGF no sobrenadante das célula tratadas com CpLP por ELISA. As células também foram submetidas a quantificação de RNA específico para VEGF por RT-PCR. A concentração 1,56µg/mL de CpLP foi capaz de estimular a migração e proliferação celular após 12,18(p<0,05) e 24h(p<0,01)em relação ao grupo controle e 1,56 e 3,12µg/mL aumentaram apenas no tempo de 24h(p<0,01). No ensaio com a mitomicina após 6h, houve aumento da migração nas concentrações de 0,78(p<0,01) e 1,56µg/mL(p<0,05) mostrando que mesmo sem proliferar, houve recomposição da área do arranhão. A concentração de 3,12µg/mL foi capaz de induzir a produção de TGF-b e VEGF(p<0,05),corroborando com o aumento da expressão gênica de VEGF comparado ao grupo controle(p<0,05).O presente trabalho demonstrou que CpLP acelera a cicatrização in vitro por promover a migração e proliferação celular além de induzir a liberação de mediadores essenciais na cicatrização.