ISOLAMENTO, PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO PARCIAL DE UMA NOVA LECTINA DA ESPONJA APLYSINA FISTULARIS.

Abstract

Lectinas são proteínas de origem não-imunológicas capazes de se ligar a carboidratos de maneira reversível, sem alterar a estrutura do mesmo. São encontradas em muitos organismos, como por exemplo: vírus, fungos, plantas e animais. Essas moléculas possuem um grande potencial biotecnológico por exibirem atividades como anticâncer, antibacteriana e combater doenças humanas. Este trabalho tem por objetivo isolar e caracterizar parcialmente uma nova lectina da espoja marinha Aplysina fistularis. As esponjas foram coletadas no Parque Estadual Marinho da Pedra da Risca do Meio, Fortaleza, CE. Para realizar a extração, as esponjas foram cortadas e homogeneizadas em tampão Tris-HCl 20 mM, pH 7,6, contendo NaCl 150 mM e CaCl2 20 mM (TBS/Ca2+), o material foi filtrado, centrifugado e o sobrenadante denominado de extrato bruto (EB). As proteínas foram precipitadas com (NH4)2SO4 e submetidas à cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose e eluída com lactose 0,3 M. A atividade hemaglutinante (A.H) da lectina foi avaliada pelo método de diluição seriada em placas de microtitulação e sua especifidade foi avaliada através da inibição de A.H frente à glicoproteínas e carboidratos. Os efeitos de pH, íons metálicos e temperatura sobre a A.H da lectina também foram avaliados. O grau de pureza e massa molecular estimada foi avaliada por eletroforese em SDS-PAGE. O E.B da esponja apresentou atividade contra eritrócitos humanos do tipo O. A lectina apresentou atividade ótima em pH 7,0 e em temperatura de até 60°C. Sua massa molecular é de aproximadamente 70 kDa, em condições não redutoras e 30 kDa, em condições redutoras. A A.H da lectina da esponja A. fistularis foi inibida por xilose e alguns carboidratos complexos. Os resultados da caracterização da nova lectina serão usados como bases para outros experimentos e pesquisas biotecnológicas. Os autores são gratos aos seguintes órgãos UFC, CNPq, CAPES e FUNCAP pelo apoio e fomento.