EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO PARA ANÁLISES MOLECULARES DE ISOLADOS DE FUSARIUM ORIUNDOS DE FRUTOS DE MELÃO COM SINTOMA DE PODRIDÃO

Abstract

A podridão de Fusarium vem se destacando como uma das principais doenças de pós-colheita em frutos de melão na região Nordeste do Brasil, a qual se destaca na produção desta cultura, comprometendo a sua comercialização internacional. Nessa perspectiva, o conhecimento do agente causal da doença é determinante para seu manejo adequado, pois só assim poderão ser adotados métodos mais eficientes de controle. Diante disto e com o advento da biologia molecular, as análises filogenéticas baseadas em DNA fornecem o entendimento e reconhecimento da diversidade genética das espécies. Desta forma, o trabalho teve como objetivo obter DNA genômico dos isolados de Fusarium associados a podridão em frutos de melão obtidos das principais áreas produtoras do Nordeste. Os isolados foram previamente identificados como pertencentes ao gênero Fusarium por caracteres morfológicos, purificados e submetidos ao cultivo monospórico. Na preparação para extração do DNA genômico, os isolados foram cultivados em meio líquido BD (batata-dextrose) sob agitação de 70 rpm por 72 horas, a temperatura de 25 a 30 ºC e fotoperíodo de 12 horas. Utilizou-se nitrogênio líquido para o rompimento das paredes celulares através da maceração mecânica. O protocolo de extração de DNA foi adaptado de Murray & Thompson (1980), utilizando-se o método CTAB. O DNA genômico extraído foi avaliado por meio de eletroforese em gel de agarose 1% e visualizado em transiluminador. Conclui-se que o método de extração utilizado foi responsável pela obtenção de DNA genômico dos isolados, com alto peso molecular (> 10.000 pb) e de qualidade. O material genético obtido será utilizado para amplificação de fragmentos específicos de DNA por reação em cadeia da polimerase (PCR) e posteriores análises filogenéticas.