ESTUDOS ESTRUTURAIS E DE LIGAÇÃO DE UMA LECTINA DA ESPONJA MARINHA AIOLOCHROIA CRASSA

Abstract

Lectinas são proteínas ubíquas que se ligam reversivelmente a carboidratos, sendo assim capazes de decifrar o glicocódigo. Em esponjas marinhas, as lectinas podem desempenhar uma diversidade de funções, tais como interação célula-célula, espiculogênese e defesa. Além disso, algumas dessas proteínas demonstram enorme potencial biotecnológico devido a sua capacidade de reconhecer carboidratos específicos da membrana celular. O objetivo deste trabalho foi determinar a sequência de aminoácidos e a especificidade de ligação da lectina da esponja marinha Aiolochroia crassa (AcrL). A massa molecular foi estimada em gel de eletroforese – SDS-PAGE. A estrutura primária parcial foi determinada por espectrometria de massas em um espectrômetro do tipo ESI-Q-ToF. A atividade hemaglutinante foi avaliada pelo método da dupla diluição seriada e a especificidade da lectina foi determinada por inibição da atividade frente a carboidratos e glicoproteínas. A massa molecular em condições desnaturantes foi estimada em aproximadamente 15 kDa. As bandas proteicas foram excisadas do gel para o sequenciamento de aminoácidos. Cinco peptídeos obtidos por digestão com tripsina e dois peptídeos obtidos por digestão com quimotripsina foram sequenciados manualmente e consistiram em 79 resíduos de aminoácidos. Aproximadamente 58% da estrutura primária de AcrL foi determinada. A sequência parcial de aminoácidos de AcrL apresentou identidade de 41% e similaridade de 54% com uma lectina de Chondrilla caribensis, CCL. A atividade hemaglutinante foi inibida pelas glicoproteínas fetuína, asialofetuína, mucina submaxilar bovina e mucina de estômago de porco. As concentrações inibitórias mínimas foram 16,25 µg.mL -1 , 62,5 µg.mL -1 e 250 µg.mL -1 , respectivamente. Neste trabalho, a lectina de Aiolochroia crassa teve sua estrutura primária parcialmente caracterizada e sua especificidade determinada. Esses resultados embasarão novos ensaios e modelos de aplicação biológica.