POTENCIALIZAÇÃO DA ATIVIDADE LARVICIDA DE PROTEÍNAS CRY DE BACILLUS THURINGIENSIS SOBRE AEDES AEGYPTI PELO INIBIDOR DE PROTEASES DE SEMENTES DE ALBIZIA LEBBECK (L.) BENTH

Abstract

Mosquitos são um dos principais vetores para doenças, ou seja, atuam transmitindo patógenos de um hospedeiro para o outro. No Brasil, doenças como dengue, chikungunya e Zika representam um sério problema para a saúde pública e podem ser evitadas através do combate ao vetor Aedes aegypti por meio do uso de inseticidas. Embora seja um método eficaz, o uso indiscriminado e contínuo desses inseticidas, geralmente sintéticos, propiciou o surgimento de populações de mosquitos resistentes a esses compostos. A partir disso, inúmeras pesquisas buscam a obtenção de novas biomoléculas com atividade inseticida. Desse modo, esse trabalho buscou avaliar o potencial biológico do inibidor de tripsina de sementes de Albizia lebbeck (L) Benth quanto às suas propriedades inseticidas e potencialização das toxinas larvicidas de Bacillus thuringiensis (Bt) sobre as larvas de Ae. aegypti. O inibidor de tripsina de A. lebbeck (AlTI) foi obtido a partir da extração de proteínas da farinha delipidada de sementes utilizando tampão Tris-HCl 50 mM pH 7,5. Em seguida, o extrato proteico (EP) foi submetido a precipitação com ácido tricloroacético (TCA) 20% para obtenção de uma fração com concentração final de 5% (AlF5) e, logo após, dialisada e liofilizada. A fração F5 foi solubilizada em tampão de extração e submetida a cromatografia de afinidade à tripsina para a purificação do AlTI. O SDS-PAGE evidenciou uma banda com massa aparente de 21 kDa. O AlTI foi capaz de inibir in vitro a atividade da tripsina e as proteases intestinais das larvas do mosquito em 48,7 e 45,2% nas concentrações de 0,5 e 50 µg/mL, respectivamente. A potencialização do efeito tóxico foi observada nas larvas do inseto através de combinações entre a concentração letal (CL20) das toxinas de Bt e diferentes concentrações de AlTI (100, 50, 25 e 12,5 µg). Os dados obtidos demostram o potencial biotecnológico desse inibidor de protease para o desenvolvimento de bioinseticidas para o combate desses mosquitos vetores de doenças.