ESTUDOS ESTRUTURAIS DA LECTINA DA ALGA MARINHA VERMELHA BRYOTHAMNION SEAFORTHII: EXPRESSÃO E ANÁLISE POR ESPECTROMETRIA DE MASSAS.

Abstract

As lectinas constituem um grupo de proteínas ou glicoproteínas de origem não imune, que se ligam de forma específica e reversível a carboidratos. As interações proteína-carboidrato estão relacionadas com as atividades biológicas dessas moléculas, por isso, os estudos estruturais são importantes para elucidar a função e aplicabilidade de lectinas. A expressão de proteínas recombinantes é uma abordagem que permite a produção heteróloga desses compostos para produzir proteínas de forma pura e homogênea, apresentando uma caracterização mais precisa e um espectro mais amplo de aplicação. A lectina presente na alga marinha vermelha Bryothamnion seaforthii (BSL) possui massa molecular aparente de 9 kDa na presença e ausência de 2-mercaptoetanol, em SDS-PAGE, e em MALDI-MS apresenta cinco isoformas. BSL possui elevado potencial biotecnológico devido suas atividades pró-cicatrizantes, antinociceptiva, antibacteriana, anticâncer, anti-hiperglicêmica e antioxidante. O presente trabalho objetivou a expressão heteróloga de uma das isoformas (rBSL3) e análise da proteína recombinante por espectrometria de massas. O gene sintético foi inserido no vetor de expressão pET32a, contendo resistência à ampicilina, proteína de fusão tioredoxina e sítio para protease TEV. Os testes de expressão da proteína recombinante foram conduzidos em Escherichia coli Bl21(DE3), submetidos a variações de temperatura (18 °C, 25 °C, 30 °C e 37 °C) com 0,05 mM de IPTG e analisadas por SDS-PAGE. Após a expressão, a banda mais evidente foi excisada do gel, digerida e avaliada por MS/MS. Na expressão, a lectina foi detectada na fração solúvel em todas as temperaturas testadas, e a análise por MS/MS confirmou a expressão da proteína de fusão-lectina de forma heteróloga. Desta forma, fomos capazes de produzir a rBSL na fração solúvel e passos posteriores para finalização do protocolo serão realizados. Apoio financeiro: UFC, CNPq, CAPES.