APROVEITAMENTO DA TORTA RESIDUAL DE SEMENTES DE PINHÃO-MANSO PARA A OBTENÇÃO DA CURCINA: UMA RNA-N-GLICOSIDASE

Resumo

A torta residual de sementes de pinhão-manso (Jatropha curcas) é um subproduto da extração de óleo pela indústria de biodiesel. Devido à presença de fatores limitantes de natureza tóxica, alergênica e antinutricional, como os ésteres de forbol, utilização da torta ainda é bastante. Além desses, as sementes de J, curcas também possuem uma proteína inativadora de ribossomos denominada curcina. A curcina pertence à classe das RIPs tipo 1, que são proteínas com potencial biotecnológico por apresentarem uma série de atividades biológicas, incluindo atividade anticâncer e apoptótica. O objetivo desse trabalho foi a purificação, caracterização biofísica e da atividade biológica da curcina obtida da torta de J. curcas. Inicialmente, a torta de sementes foi delipidada com hexana (1:5 m/v) por 12 h e transformada numa farinha fina e homogênea. Essa farinha foi submetida a uma à extração (1:10 m/v) com tampão PBS pH 7,2 por 3 horas e centrifugado a 12.000 x g durante 20 min a 10 oC. O extrato protéico obtido foi precipitado com sulfato de amônio de 0-80% por 6 h a 4 oC. O precipitado foi ressuspenso no mesmo tampão de extração, dialisado e fracionado em uma coluna de Sephadex G-100. Foram obtidos cinco picos protéicos (denominados P1, P2, P3, P4 e P5). Após ensaios eletroforéticos em gel de poliacrilamida (12,5%), foi observado uma única banda protéica de aproximadamente 28 KDa nas frações do P2, similar ao peso molecular da curcina. Essas frações também foram capazes de depurinar RNA ribossomais de Pichia pastoris na concentração de 1 µg, confirmando a atividade RNA-N-glicosidase e, consequentemente, a presença da curcina na torta das sementes. Além disso, a curcina obtida da torta apresentou semelhanças conformacionais com a curcina de sementes de J. curcas quando avaliada por dicroísmo circular e espectroscopia de fluorescência intrínseca. A predição da estrutura secundária mostrou que as frações de curcina possuem 43,6% de folhas- e 28,5% de helices- na sua composição.