Purificação e atividade anticoagulante de glicosaminoglicanos isolados da pele da carpa comum, Cyprinus carpio

Resumen

Investigações bioquímicas são ferramentas importantes para a descoberta de novos agentes anticoagulantes presentes em uma grande variedade de organismos aquáticos e para uso em substituição à tradicional da heparina (HEP) na clínica médica. Objetivou-se purificar e avaliar a atividade anticoagulante dos glicosaminoglicanos (GAGs) isolados da pele da carpa comum Cyprinus carpio. Os GAGs foram extraídos com o uso de papaína bruta em tampão acetato de sódio 0,1 M (pH 5,0) contendo cisteína 5 mM e EDTA 5 mM, seguido por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose, na qual foram eluídas cinco frações (FI; FII; FIII; FIV e FV), utilizando um gradiente de NaCl. As frações foram concentradas por liofilização e submetidas à eletroforese em gel de agarose 0,5%. A atividade anticoagulante foi avaliada através do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), usando plasma humano normal e expressa em unidades internacionais por mg de polissacarídeo, utilizando HEP padrão (193 UI mg^-1). A metodologia foi eficiente na extração e fracionamento dos GAGs, revelando, por eletroforese, a identificação preliminar de moléculas de dermatam sulfato e a preponderância de heparam sulfato. A atividade anticoagulante expressou-se dose-dependente, no entanto resultando em, no máximo, 4,89 UI mg^-1 em relação à HEP. Portanto, o emprego da digestão proteolítica no isolamento de GAGs presentes na pele de C. carpio sugere posteriores estudos quanto à caracterização do heparinóide, com a utilização de enzimas de degradação específicas. Estudos da técnica com outras espécies cultivadas também seriam indicados.